Video: Preparare, usare e diluire una soluzione con una data concentrazione 2025
Il tampone TAE è una soluzione costituita da base Tris, acido acetico e EDTA (Tris-acetato-EDTA). È storicamente il tampone più comune utilizzato per l'elettroforesi del gel agarosico nelle analisi dei prodotti del DNA derivanti da amplificazione PCR, protocolli di purificazione del DNA o esperimenti di clonazione del DNA.
Questo buffer ha una bassa resistenza ionica e una bassa capacità di buffering. È più adatto all'elettroforesi di grandi parti (> 20 kb) di DNA e dovrà essere sostituito frequentemente o ricircolato per tempi di esecuzione del gel più lunghi (> 4 h).
Con questo in considerazione, si consiglia di considerare diversi lotti del buffer.
Dato che il buffer è facile da eseguire e che i passaggi possono essere eseguiti in modo rapido, fare più di un lotto alla volta non dovrebbe essere particolarmente idonea o difficile da tirare fuori. Utilizzando le istruzioni riportate di seguito, ci vorranno solo 30 minuti per fare il buffer TAE. Ecco come:
Preparare una soluzione di titoli di EDTA
Una soluzione EDTA (etilendiammina tetraacetica) viene preparata prima del tempo. L'EDTA non entrerà completamente in una soluzione finché il pH non viene regolato a circa 8. 0. Per una soluzione di 500 millilitri di 0,5 M EDTA, pesare 93. 05 grammi di sale di sodio EDTA (FW = 372. 2 ). Sciogliere in acqua deionizzata da 400 millilitri e regolare il pH con idrossido di sodio (NaOH). Portare la soluzione fino ad un volume finale di 500 millilitri.
-> ->Fissare una soluzione di riserva di TAE
Preparare una soluzione di TAE concentrata (50 volte) misurando 242 grammi di base Tris (FW = 121.14) e sciogliendola in circa 750 millilitri di acqua deionizzata.
Aggiungere con attenzione 57,1 ml di acido glaciale e 100 ml di 0,5 M EDTA (pH 8,0). Successivamente, regolare la soluzione ad un volume finale di 1 litro. Questa soluzione di magazzino può essere conservata a temperatura ambiente. Il pH di questo tampone non è regolato e dovrebbe essere di circa 8. 5.
Preparare una soluzione di lavoro di TAE
La soluzione di lavoro del tampone 1x TAE è ottenuta semplicemente diluendo la soluzione di riserva di 50 volte in acqua deionizzata.
Le concentrazioni di soluto finale sono di 40 mM. Tris acetato e 1 mM EDTA. Il buffer è ora pronto per essere utilizzato in esecuzione di un gel agarosio.
Cosa serve per il buffer
Dato che il buffer TAE richiede solo un set di istruzioni rapido e semplice, la quantità di materiali necessari non è eccessiva. Avrete bisogno solo di sale di sodio EDTA, base di Tris e acido acetico glaciale.
La creazione del buffer richiede anche un misuratore di pH e standard di calibrazione, come appropriato. Avrete anche bisogno di bicchieri da 600 millilitri e 1500 millilitri o bottiglie e cilindri graduati. Infine, avrete bisogno di acqua deionizzata, mescolate le barre e mescolate le piastre.
Conclusione
Dove si intende effettuare il buffer - in un sito scolastico, un sito di lavoro o un'altra località, come la tua casa?Controllare l'inventario prima di cominciare ad assicurarsi di avere tutti i materiali di cui sopra per il buffer TAE.
Se preferisci non pagare per i materiali, ti consigliamo di fare il buffer esterno della tua casa. È possibile ordinare facilmente i materiali necessari online o visitare un negozio specializzato.
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