Come fare TBE Buffer in 3 semplici passi

TBE buffer è una soluzione tampone costituita da base Tris, acido borico e EDTA (o Tris-borato-EDTA complessivamente). Questo tampone viene spesso utilizzato per l'elettroforesi a gel agarosico nell'analisi dei prodotti del DNA derivanti da amplificazioni PCR, protocolli di purificazione del DNA o esperimenti di clonazione del DNA.

TBE buffer è particolarmente utile per la separazione di piccoli frammenti di DNA (MW <1000), come piccoli prodotti di digestione enzimatica di restrizione.

TBE ha una maggiore capacità di buffer e darà una risoluzione più nitida rispetto al buffer TAE. Il tampone TAE è una soluzione costituita da base Tris, acido acetico e EDTA (Tris-acetato-EDTA).

TBE è generalmente più costoso di TAE e inibisce la ligasi del DNA, che può causare problemi se sono previsti ulteriori passi di purificazione e di ligation del DNA. Con i tre semplici passaggi che seguono, imparare a fare buffer TBE. Non dovrebbe richiedere più di 30 minuti per creare questo buffer. Ecco come:

Preparare una soluzione di riserva di EDTA

Una soluzione EDTA (etilendiammina tetraacetica) deve essere preparata prima del tempo. EDTA non entrerà completamente nella soluzione finché il pH non viene regolato a circa 8. 0. Per una soluzione di 500 millilitri di 0,5 M EDTA, pesare 93. 05 grammi di sale di sodio EDTA (FW = 372. 2). Quindi, sciogliere in 400 ml di acqua deionizzata e regolare il pH con NaOH. Dopo di che, aggiungere la soluzione ad un volume finale di 500 millilitri.

- Preparazione di una soluzione di TBE

Preparare una soluzione di concentrato (5x) di TBE pesando 54 g di base Tris (FW = 121,14) e 27,5 g di acido borico (FW = 61,88) e sciogliendo sia in circa 900 millilitri di acqua deionizzata. Quindi aggiungere 20 ml di 0,5 M EDTA (pH 8,0) e regolare la soluzione ad un volume finale di 1 litro.

Questa soluzione può essere conservata a temperatura ambiente ma un precipitato si forma in soluzioni più vecchie. Conservare il tampone in bottiglie di vetro e scartare se si è formato un precipitato.

Preparare una soluzione di lavoro di TBE

Per l'elettroforesi con gel agarosio, può essere utilizzato un tampone TBE ad una concentrazione di 0,5 x (diluizione 1: 10 dello stock concentrato). Diluire la soluzione di riserva di 10 volte in acqua deionizzata. Le concentrazioni finali di soluto sono 45 mM Tris-borato e 1 mM EDTA. Il buffer è ora pronto per essere utilizzato in esecuzione di un gel agarosio.

Cosa avete bisogno

Per fare il buffer TBE, avrai bisogno di quattro sostanze. Gli elementi rimanenti di questo elenco sono attrezzature. Le quattro sostanze necessarie sono il sale disodico EDTA, la base Tris, l'acido borico e l'acqua deionizzata.

Per quanto riguarda le apparecchiature, è necessario un misuratore di pH e standard di calibrazione, come opportuno. Oltre a questo, avrai bisogno di bicchieri da 600 millilitri e 1500 millilitri. Arricchire le vostre esigenze di attrezzatura sono cilindri graduati e mescolare barre e mescolare piatti.

Controlla l'inventario del laboratorio che userai per assicurarvi di avere tutto il necessario prima di iniziare. Niente è peggio di dover fermarsi al centro della preparazione di una soluzione perché hai esaurito i materiali appropriati.

Se il tuo laboratorio è a scuola o sul tuo sito di lavoro, controlla con il personale giusto per vedere che dispongono di tutti gli elementi del magazzino. In questo modo potrai risparmiare tempo e energia alla fine.