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L'attività specifica è un termine usato per misurare la velocità di reazione di un enzima con un substrato.
L'attività enzima specifica (attività specifica per breve) è una misura della purezza dell'enzima e citata come unità / mg . Il valore diventa più grande in quanto un preparato enzimatico diventa più puro poiché la quantità di proteine (mg) è tipicamente inferiore, ma la velocità di reazione resta uguale (o può aumentare a causa di ridotte interferenze o rimozione degli inibitori).
- <->Attività specifica: Misurare la cinetica enzimatica
Come un po 'di sfondo, gli enzimi sono proteine che agiscono come catalizzatori per ridurre la quantità di energia di attivazione per una reazione a verificarsi. L'energia di attivazione è l'energia necessaria per ottenere le reazioni "avviate" poiché molte reazioni non si verificano molto rapidamente (o si verificano affatto) se sono termodinamicamente possibili.
Gli enzimi catalizzano reazioni specifiche in un determinato sito (noto come sito attivo) dove i reagenti si legano e reagiscono per generare i prodotti. I substrati hanno siti attivi specifici solo per loro, in modo che nessuna altre sostanze legano o reagiscano nello stesso sito. Come un blocco e una chiave, ogni enzima catalizzerà solo una reazione specifica (con alcune eccezioni).
L'attività specifica è usata nei metodi di isolamento proteico per indicare la percentuale di purificazione. È importante conoscere questa unità quando si acquista gli enzimi per indicare esattamente quanto quantità di enzima puro stai ricevendo.
Quando si misura la cinetica enzimatica (la velocità di reazione di un enzima con un substrato o una superficie), l'attività specifica è definita come la quantità di substrato convertito dall'enzima (reazioni catalizzate), per mg proteina nel preparato enzimatico, per unità di tempo.Un esempio di attività specifica sarebbe:
L'attività specifica dell'enzima isolata è stata misurata a 150 umoles / min / mg proteina prima della purificazione e 800 umoles / min / mg, dopo la purificazione.
L'attività specifica è una misura importante della purezza dell'enzima. Diversi lotti di un enzima puro devono avere gli stessi valori e addirittura diluire una soluzione enzimatica molte volte avranno valori di attività specifici identici anche se ci saranno diversi valori di attività enzimatica. Questo è perché nel calcolo dell'attività specifica, il numeratore (unità / ml) e denominatore (mg / ml) sono influenzati ugualmente.
- L'attività specifica è molto diversa dall'attività, ma il calcolo di attività specifica è ancora dipendente dal valore dell'attività. Ciò significa che il valore specifico di attività specificato dipenderà anche dalla definizione dell'unità enzima.
Un gruppo di enzimi che hanno un valore di attività specifico inferiore al previsto possono contenere molecole enzimatiche che sono state alterate o mescolate con impurità.
È possibile che un enzima abbia diversi valori di attività misurati quando misurato in diversi laboratori (ovvero differenze reali nell'attività misurata, non differenze apparenti dovute all'utilizzo di diverse definizioni di unità).
Il modo in cui viene effettuato un dosaggio (il metodo di test per determinare la purezza degli enzimi) influenzerà i valori di attività riportati. Ad esempio, gli enzimi sono generalmente più attivi tra temperature di 37 gradi centigradi rispetto a 20 gradi centigradi, quindi se un dosaggio viene eseguito a 21 gradi centigradi, i valori si differenziano dai test effettuati a una temperatura di 32 gradi centigradi (tipicamente , i dosaggi vengono eseguiti ad una temperatura compresa tra 20-37 gradi Celsius).
Così la definizione dell'unità enzima sarebbe meglio espressa in quanto: 1 unità (U) è la quantità di enzima che catalizza la reazione di 1 nmol di substrato al minuto in condizioni standard.
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